El Virus de la Hepatitis C (VHC) es un virus ARN cuyo mecanismo de traducción es Cap-independiente: el ribosoma es reclutado a una región estructurada del extremo 5?-UTR del genoma denominada IRES. Aunque es altamente conservada, existen variantes que modifican su secuencia primaria y/o estructura, alterando de esta forma la eficiencia traduccional. Asimismo, la unión de miR-122 al 5?-UTR aumenta la traducción, aunque se desconocen los mecanismos subyacentes dado que esta unión ocurre fuera del IRES. Se ha propuesto la existencia de un sitio de unión no canónica de miR-122 en el dominio IV del IRES, que estaría involucrado en modular la traducción. Consecuentemente, tanto diferentes mutaciones, como la unión de miR-122 a este nuevo sitio, podrían afectar significativamente la traducción y el fitness viral, por lo cual estudios al respecto podrían sentar las bases para futuros diseños de vacunas atenuadas y de estrategias antivirales para inhibir el IRES. Los objetivos de este trabajo son: 1) Estudiar, a nivel traduccional y evolutivo, variantes naturales del IRES de VHC (con múltiples mutaciones) traduccionalmente ineficientes previamente caracterizadas, a fin de determinar cómo contribuye cada mutación al fenotipo; así como analizar la dinámica evolutiva de estas variantes; 2) Profundizar en la caracterización funcional de la unión miR122-IRES para determinar su influencia en la eficiencia traduccional. Los abordajes metodológicos incluirán ensayos in silico y ex vivo. Las variantes de interés se generarán por mutagénesis en clones infecciosos reporteros de VHC. Los ARNs generados in vitro se transfectarán en células Huh7.5 conjuntamente con ARNs monocistrónicos reporteros y la relación entre las bioluminiscencias se utilizará como índice de eficiencia traduccional. La dependencia de miR-122 se analizará mediante el agregado de inhibidores, la evolución de las variantes por secuenciación masiva y la afinidad de unión IRES-ribosoma por calorimetría de titulación isotérmica (ITC).