Las amastinas son una familia de glicoproteínas exclusiva de tripanosomátidos que puede subclasificarse en a-/beta-/delta-/g-amastinas. En Trypanosoma cruzi, solo se han encontrado beta- y delta-amastinas, expresadas en epimastigotas y amastigotas respectivamente. Análisis recientes (no publicados), revelaron la presencia de un tercer subgrupo (omega-amastinas) que formaría un clado diferente en T.cruzi. Estudios en delta-amastinas han permitido asignarles un posible rol en la interacción hospedero-parásito y/o en transporte a través de la membrana plasmática. Se desconoce la función de las beta-, y omega-amastinas. Estudios de la expresión estadío-específica de beta-amastinas, revelaron que la proteína TcAlba30 es capaz de regular los niveles de ARNm en epimastigotas, aunque su función en amastigotas y tripomastigotas no ha sido indagada, ni su participación en la regulación delta y omega-amastinas. Este proyecto estudiará el rol de los tres grupos de amastinas en la infección celular de T.cruzi. Mediante el sistema CRISPR/Cas9 se fusionarán los genes de cada subgrupo de amastinas con un péptido FLAG. La adición de este tag permitirá monitorear la expresión/localización de cada subfamilia de amastinas durante el proceso de infección por microscopia confocal. Además, se generarán parásitos knockout sustituyendo cada subfamilia por una secuencia codificante para el péptido FLAG. Se analizará todo el proceso de infección en células de mamíferos comparando parásitos knockout y etiquetados para cada subfamilia. Se estudiará el rol de la proteína TcAlba30 en la regulación estadío-específica de amastinas. Las líneas estables de parásitos FLAG-beta-/delta- y omega-amastinas, serán re-editadas sustituyendo el gen tcAlba30 por el tag cMyc. Se evaluarán los niveles de ARNm/proteína de cada subgrupo de amastinas en ausencia de TcAlba30 en epimastigotas, amastigotas y tripomastigotas celulares de T.cruzi El estudio de las amastinas en la infección de T.cruzi y su regulación estadío-específica, contribuirá al entendimiento de la interacción hospedero-parásito y de la regulación de una familia multigénica en T.cruzi.